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       【摘要】 
       目的考察AB-8和FL-3树脂对山楂叶中黄酮类物质的纯化效果。方法通过动态洗脱实验，测定不同实验条件下总黄酮类化合物含量，计算吸附率及洗脱率。结果AB-8在上样量24 mg/g，水洗流速1 ml/min，溶剂浓度70%，吸附pH值5，洗脱流速1 ml/min时，产物的纯度85%，产率79%，FL-3在相同条件下，产物纯度85.6%，产率85%。结论FL-3树脂应用于黄酮类物质的纯化，其纯化效果稍好于AB-8,可以达到纯化目的。
       【关键词】  大孔树脂； AB-8； FL-3；总黄酮； 纯化； 山楂叶
       山楂叶黄酮类化合物对心血管系统疾病具有降压、降血脂、增加冠脉流量、改善心肌供血供氧等功效，对高血压病、高血脂、冠心病及心绞痛等心血管疾病均具有良好疗效。此外，山楂叶黄酮类化合物较高的抗氧化、抗自由基活性，是生产天然保健食品理想的添加剂［1，2］。我国20世纪70年代初开始有人用大孔吸附树脂进行植物成分的分离纯化研究，尤其是AB-8，在黄酮类物质的纯化过程中应用较多。如王超等［3］应用AB-8对无花果黄酮的纯化， 李玉霞 ［4］对菱角壳黄酮的纯化。而FL-3在实际应用中相对较少，所以本研究对比AB-8和FL-3对山楂叶中黄酮类物质的纯化效果，以得出两者中效果较好的一个。
       1  仪器与材料
       　　
       1.1  仪器 
       VIS723G型可见-紫外分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；80-2 离心沉淀器（上海精密科学仪器有限公司）；RE-52A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。
       1.2  材料 FL-3 (天津欧瑞生物科技有限公司) ；AB-8 (南开大学化工厂)  ；山楂叶（承德）。
       2  方法
       2.1  吸附及洗脱实验将树脂进行预处理，先用乙醇浸泡12 h，以除去其中的小分子杂质。而后湿法装柱，径高比为1∶15。以一定浓度的少量乙醇将样品溶解，并加入到柱子内，而后以一定的流速用水对其进行洗脱以达到吸附的目的。再用一定浓度的乙醇溶液对吸附完毕的树脂进行洗脱，分批收集并应用药典上规定的“NaNO2-Al(NO3)3-NaOH”体系来测定纯化液中总黄酮类化合物的含量。
       2.2  吸附率及洗脱率将所要纯化的粗提物溶解并测定其中的黄酮含量M,并对在树脂中吸附完全之后的溶液进行测定求出未吸附的黄酮量m， 则吸附率为： 吸附率（%）=M-mM×100%
       
       对树脂进行洗脱，待完全之后，测定得收集洗脱液中所含有的黄酮量为N。
       则洗脱率为： 洗脱率（%）=NM-m×100%
       3  结果
       3.1  动态吸附
       3.1.1  上样量(黄酮/树脂)对吸附率的影响见图1。
       
       由图1可以看出FL-3的吸附率要好于AB-8，并且都是随着黄酮量（mg/g）的增加吸附率逐渐减小的，这主要是因为树脂有一个饱和吸附量，当达到这个量之后再增加黄酮只会增加损失。所以选择24 mg/g进行吸附。
       3.1.2  水洗脱流速对吸附率的影响见图2。
       
       由图2可以看出随流速的增加两者的吸附率都会降低，这主要是因为当流速增加时会减少被吸附物和树脂的接触时间，进而减少吸附效果，但是我们也可以发现FL-3的吸附效果要稍好于AB-8。但考虑到流速太慢的话会加大经济投入，所以选择1 ml/min进行吸附。
       3.1.3  pH值对吸附率的影响见图3。
       由图3数据可以看出在pH值为5时两者的吸附率最高，而在pH值为9时最低，这主要时因为黄酮类物质显一定的酸性，所以在酸性条件下比较容易吸附，在碱性条件下效果不是很好。
       3.1.4  洗脱溶剂对洗脱率的影响见图4。由图4可以看出，随着溶剂浓度的增加洗脱率的增加，到50%时FL-3基本不变了，而AB-8在70%左右基本达到平衡。这时因为随着溶剂浓度的增加，增大了黄酮在溶剂中的溶解度，也进而加大了其的解吸力。
       3.1.5  洗脱流速的影响见图5。
       
       由图5可以看出，随着流速的增加洗脱率降低，这里的原因和“3.1.2”项中的相同，都是因为减少了接触时间所致。
       3.1.6  树脂的使用寿命树脂在纯化的过程中，不仅吸附黄酮类物质，还吸附一些色素以及某些难以解吸的物质，而导致树脂的使用寿命降低。
       由图6可以看出，随着使用次数的增加吸附率减少的很多，从原来的将近90%降低到60%左右。这主要是因为树脂在纯化的过程中，不仅吸附黄酮类物质，还吸附一些色素以及某些难以解吸的物质，而导致树脂的吸附率降低。
       3.2  纯度测定上样量为24 mg/g，水洗流速为1 ml/min，溶剂浓度为70%，吸附pH值为5，洗脱流速为1 ml/min时，AB-8的纯化效果可以达到85%，产率为79%；而FL-3在上样量为24 mg/g，水洗流速为1 ml/min，溶剂浓度为50%，吸附pH值为5，洗脱流速为1 ml/min时，其纯化效果可以达到85.6%，产率为85%。
       4  结论
       
       FL-3是一种大容量并且专门应用于黄酮类物质纯化的树脂，其纯化效果稍好于AB-8，而且产率也高，所以FL-3作为一种新型的黄酮类物质的纯化树脂完全可以达到纯化目的。
       【参考文献】
         　　［1］Zhang P C, Xu S X. Flavonoid ketohexosefuranosides from the leaves of Crataegus pinnatif ida Bge. varm ajorN. E. Br ［J］. PHytochemistry, 2001, 57: 1249.
       
       ［2］Svedstron U, Vuorela H, Kostia Inen R, et al. Isolation and identification of oligomeric procyanidins from Crataegus leaves and flowers［J］. PHytochemistry, 2002, 60: 821.
       
       ［3］王 超，马海乐，王振斌.AB-8大孔树脂分离提纯无花果总黄酮的研究［J］.食品研究与开发,2005,26(4): 11.
       
       ［4］李玉霞，尚庆坤，许蕾蕾.AB-8大孔树脂对菱角壳黄酮提取物的吸附性能研究［J］.北华大学学报（自然科学版）,2006,7(5): 403.