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       【摘要】 
       目的测定不同产地白英多糖的含量，为白英的质量评价提供理论依据。方法利用水提醇沉法从白英中提取得到多糖，采用苯酚-硫酸法测定3个产地白英的多糖含量。结果不同产地白英多糖含量分别为:安徽1.66%，浙江1.84%，江苏1.62%。结论苯酚-硫酸法简便、快速、准确、重现性好，适合测定白英中多糖含量，不同产地白英多糖的含量差异不大,为白英的质量评价提供理论参考。
       【关键词】  白英； 多糖； 苯酚-硫酸法
       白英Solanum lyratum Thunb.系茄科植物，全草作为传统中药已有二千多年的历史，最早见于《本经》记载，多产于浙江、江苏、安徽，性味苦、辛、微寒。常与他药伍用治疗肺癌、胃癌、肝癌等多种癌症，此外还用于治疗感冒发热、黄疸性肝炎、胆囊炎、水肿等。白英的化学成分研究表明白英中含有黄酮类、多酚类、有机酸类、多糖类、倍半萜类、甾醇类、香豆素类等多种化合物［1］。
       多糖是构成生命的基本物质之一，广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中，是一类天然高分子化合物。随着对多糖结构的逐步深入了解，多糖化合物的生物活性研究得以迅速发展。多糖在抗肿瘤、免疫调节、抗衰老、降血糖及降血脂等方面显示出良好的应用前景［2，3］。白英中的多糖具有多种生物活性［4，5］，不仅可以作为广谱免疫促进剂具有调节免疫功能，还可以抗感染、抗辐射、抗凝血、降血糖、预防和治疗肿瘤等。植物多糖的含量可以在一定程度上体现该药材免疫作用的强弱。白英多糖是其主要成分之一［6，7］，但目前有关白英多糖的研究报道较少，不同产地白英多糖的含量比较也未见报道。本实验利用水提醇沉法从白英中提取得到多糖，采用苯酚-硫酸法［8，9］显色测定了3个不同产地白英中多糖的含量，为选取优良药用白英产地提供依据，为白英质量评价做出补充，也为其药理作用的进一步研究提供基础。
       1  药材、试剂与仪器
       1.1  药材安徽产白英购于北京同仁堂，浙江和江苏产地的白英购于郑州市医药公司。经鉴定均为茄属植物白英。
       1.2  试剂无水葡萄糖（对照品）天津化学试剂三厂生产，其它试剂均为分析纯。
       1.3  仪器紫外可见分光光度计Jasco V-550型，V-550工作站（日本岛津科技公司）,石英吸收池；RE-52-99 型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），SHZ-D 循环水式真空泵（郑州市上街区长虹仪器仪表厂），DGB/20-002台式干燥箱（重庆试验设备厂），电子天平FA1004A（上海精密科学仪器有限公司）。
       2  方法与结果
       2.1  白英中多糖的提取精确称取安徽白英药材粉末(过60目筛)5.0g置于索氏提取器中，以石油醚回流除去脂类，药渣挥去溶剂后，用80%的乙醇提取以除去单糖、低聚糖等干扰成分，最后用水提取多糖。提取液在50℃经减压浓缩至原体积的1/3左右,浓缩液中加入3～5倍量的95%的乙醇,静置，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤多次，60℃烘干至恒重，得白英多糖。
       2.2  供试品溶液的制备精确称取安徽白英药材粉末3.0 g，置圆底烧瓶中，石油醚回流脱脂，药渣挥去溶剂后，加80%乙醇100 ml，回流提取，趁热过滤，残渣用80%热乙醇洗涤3次，10 ml/次。残渣挥干乙醇，加蒸馏水60 ml，沸水浸提，趁热过滤，残渣用热水洗涤3次，10 ml/次。洗液并入滤液中，放冷后，移置100ml的容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，精确量取上述溶液1 ml于10 ml容量瓶中，按“2.3.3”方法显色，稀释至刻度，即得供试品溶液。
       2.3  标准曲线的绘制
       2.3.1  葡萄糖标准溶液的制备精确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品10 mg，蒸馏水溶解定容于100 ml容量瓶中，配成浓度0.1 mg/ml的标准葡萄糖溶液备用。
       2.3.2  6%苯酚溶液的制备称取苯酚100 g，加铝片0.1 g和碳酸氢钠0.05 g，蒸馏收集182℃馏分。称取 6.67 g 馏分水溶解后，置于100 ml棕色容量瓶中,用水稀释至刻度。
       2.3.3  测定波长的选择精密移取葡萄糖标准溶液0.60 ml置于10 ml容量瓶中，加水补足2 ml，加入苯酚溶液1.4 ml，并迅速加入6.0 ml浓硫酸，摇匀后,放置5 min ，置沸水浴中加热15 min ，取出冷水浴10 min并稀释至刻度；另取2 ml蒸馏水，加苯酚与浓硫酸同上步骤作为参比，从370～520 nm每隔5 nm测定1次吸光度，以吸光度的最大值选择测定波长为490 nm。
       2.3.4  标准曲线的绘制精密移取葡萄糖标准溶液0.50，0.70，0.90，1.10，1.30，1.50，1.70 ml ，分别置于10 ml容量瓶中，加水补足2 ml,用“2.3.3”方法显色后,于490 nm处测吸光度，以吸光度A对溶液浓度 C(mg/ml )进行回归分析，得标准曲线回归方程：
       A=54.553 6C-0.072 7  r=0.999 2
       
       说明本方法在0.005～0.017 mg/ml范围内线性关系良好。
       2.4  精密度实验取“2.3.4”中浓度为0.009 mg/ml的对照品溶液，依“2.3.3”所述方法重复测定6次，吸光度分别为0.414，0.407，0.413，0.409，0.411，0.415，RSD为0.64%。
       2.5  换算因子的测定精确称取60℃干燥至恒重的白英多糖15mg ，置50ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取1.3 ml，用“2.3.3”所述方法显色后，测定吸光度，从回归方程中求得多糖供试液中葡萄糖浓度，计算换算因子f。f =W/(C×D)，式中W为多糖质量(mg) ,C为多糖供试液中葡萄糖浓度(mg/ml) ，D为多糖稀释因素,测得f=4.5。
       2.6  稳定性实验取“2.2”供试品溶液显色后，每隔1h测一次，连续6次，吸光度分别为0.544，0.532，0.537，0.536，0.541，0.531，RSD为0.83%。结果表明样品在1～6 h内显色稳定，在6 h内可以进行测定。
       2.7  重复性实验精密称取安徽产白英3.0g，依“2.2”步骤平行制备供试品溶液6份，用“2.3.3”所述方法测定吸光度分别为0.547，0.525，0.531，0.536，0.519，0.534，RSD为1.59%，结果表明该方法重复性良好。
       2.8  加标回收率测定精确称取安徽白英5份，每份1.5g，分别加入无水葡萄糖9mg，用“2.2”所述方法制备溶液，测定吸光度分别为0.711，0.721，0.694，0.705，0.683，计算平均回收率为96.5%，RSD为3.12%。
       2.9  多糖含量的测定按“2.2”步骤对安徽产白英进行处理，平行制备6份溶液，用“2.3.3”所述方法测定吸光度，利用回归方程求得供试液中葡萄糖的浓度,按下式计算样品中多糖的含量。
       
       多糖含量(%) = （C ×D ×f）/ W×100%
       式中C为供试液中葡萄糖浓度(mg/ml) ，D为供试液的稀释因素，f为换算因子，W为供试品质量(mg)。结果见表1。
       2.10  3个产地含量比较同法分别测定浙江与江苏产地的白英中多糖的含量。结果见表1。表1  多糖含量的测定结果（略）
       3  讨论
       3.1  显色剂的选择文献中有选用蒽酮-硫酸法测定植物中多糖的含量，但是蒽酮-硫酸法易受蛋白质的干扰，因此在用蒽酮-硫酸法测定一些中草药中多糖的含量前需除蛋白，以纯化多糖，此法容易造成多糖损失，且实验表明该法用于测定白英中多糖含量时数据重复性不好。而苯酚-硫酸法受蛋白质干扰较小，操作比蒽酮-硫酸法简单，故本实验选用苯酚-硫酸作为显色剂。
       3.2  结果分析在多糖的含量测定中，尤其当多糖组成复杂时，因较难得到相应多糖对照品，多采用葡萄糖代替对照品，测定样品中多糖的相对含量。文中以比色法测定样品中的单糖，通过单糖和多糖的换算因子计算药材中的多糖含量。结果表明，苯酚-硫酸法测多糖含量简单、快速、灵敏度高、重复性好，稳定性良好，且无需多糖纯品和贵重仪器，适合对白英多糖含量进行测定。
       
       从测定结果看出，3个主产地的中草药白英中多糖含量相差不大，测量结果对白英质量监控有一定参考价值。
       【参考文献】
         　　［1］徐 顺,王林江,刘宏民.白英化学成分和药理作用研究进展［J］.时珍国医国药,2006,17 (4):523.
       
       ［2］陈小燕,高泽立.多糖的研究进展——多糖对机体免疫功能的影响［J］.胃肠病学和肝病学杂志,2006,15(5):540.
       
       ［3］吴晓忠,罗素琴,刘乐乐,等.中药多糖抗肿瘤作用的研究进展［J］.内蒙古医学院学报,2009,21(1):81.
       
       ［4］吴亚林,黄静,潘远江.白毛藤多糖的分离和生物免疫活性研究［J］.浙江大学学报(理学版),2004,31(3):319.
       
       ［5］杨惠麟,孙志良,丁 榕,等.白毛藤多糖的提取及体外抑菌试验［J］.中兽医医药杂志, 2005,4:24.
       
       ［6］Wu Yalin, Pan Yuanjiang, Sun Cuirong. Isolation, purification and structural investigation of a water-soluble polysaccharide from Solanum lyratum Thunb［J］. International Journal of Biological Macromolecules,2005,36:241.
       
       ［7］毛建山,吴亚林,黄 静,等.白毛藤多糖的分离、纯化和鉴定［J］. 中草药,2005,36(5):654.
       
       ［8］杨惠麟,孙志良,匡光伟,等.白毛藤多糖的提取及其含量测定［J］.中兽医医药杂志,2005,6:31.
       
       ［9］张彩莹,张 良,惠丰立,等.山茱萸多糖的提取及含量测定［J］.时珍国医国药,2007,18(2):313.