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       【摘要】 
       目的研究马尾藻多糖体外抗肿瘤作用，以期为筛选抗癌辅助药提供实验依据。方法采用热水浸提法提取马尾藻多糖，MTT法检测马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549体外增殖的影响。结果3种马尾藻多糖在体外能抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549的增殖且与浓度呈正相关；对两种肿瘤的抑制效果以围氏马尾藻最明显，其次是半叶马尾藻。结论不同马尾藻多糖抗肿瘤活性不同且对不同肿瘤的抑制作用也不同，3种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z抑制作用比对肺腺癌细胞A549抑制作用强，又以围氏马尾藻多糖抑瘤作用最强。
       【关键词】  马尾藻多糖； 抗肿瘤； MTT法
       研究发现，从海洋藻类中提取的海藻多糖，不仅有提高机体免疫功能、抗肿瘤、抗辐射、防衰老及抗病毒等多种生物活性，而且具有毒性小、药源丰富的特点［1］。大量海藻处于自生自灭的状态，如果能将海藻开发为抗肿瘤药物，必将降低药物的成本［2］。本实验通过对采集于湛江硇洲岛最常见且大量生长的半叶马尾藻Sargassum hemiphyllum，亨氏马尾藻Sargassum henslowianum Agardh和围氏马尾藻Sargassum wightii等3种海藻进行多糖提取和MTT法检测，来对其体外抗肿瘤活性进行研究。
       1  材料
       1.1  海藻来源均采自广东省湛江市硇洲岛海域，由广东海洋大学海洋生物研究所谢恩义博士鉴定。
       1.2  细胞株鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549，均由广东医学院生物与化学教研室提供。
       1.3  仪器与试剂FS862A型药物粉碎仪（浙江），R205B型旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司），Megafuge1.0R型高速冷冻离心机（德国），冷冻真空干燥器（美国），TC2323型CO2培养箱（美国SHELLAB公司），ELx800酶标仪（美国BIO-TEK公司）。新生牛血清（杭州四季青公司），RPMI-1640（Gibco）,MTT（Sigma公司），实验用其它试剂均为分析纯。
       2  方法
       2.1  多糖的提取将3种海藻洗净，干燥粉碎，经热水浸提，乙醇沉淀，Sevag法去蛋白，无水乙醇多次洗涤，真空干燥得3种多糖，用RPMI-1640培养液配制成0.5，1，2，4 ，8 mg/ml的多糖溶液。
       2.2  MTT法检测多糖的体外抗肿瘤作用收集对数生长期的鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549，按0.5×104/孔接种于96孔板，每孔180 μl细胞悬液，在37℃、5%CO2条件下培养24 h后，实验组分别加入不同浓度的多糖溶液20 μl，使多糖的终浓度分别为0.05，0.1，0.2，0.4，0.8 mg/ml，对照组加相同体积的RPMI1640液，每组设3个平行孔，继续培养48 h后，每孔加入20 μl MTT（5 mg/ml）溶液,再培养4 h。小心弃去培养液，每孔加入100 μl DMSO溶解，待完全溶解后，于酶标免疫测定仪以570 nm测定各孔吸光度。根据下面的公式计算出抑制率，绘制浓度-抑制率曲线。
       
       抑制率（%）=（1-处理组吸光度/对照组吸光度）×100%
       2.3  统计学处理用SAS8.0软件进行单因素方差分析，多个样本均数与对照组样本均数之间的比较采用t检验。
       3  结果
       3.1  用MTT法检测3种多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响用不同浓度的海藻多糖处理鼻咽癌细胞CNE-2Z后，可见抑制率均随着多糖浓度的增加而增加；当浓度为0.8 mg/ml时，3种多糖对CNE-2Z细胞的抑制率分别为57.7%，45.8%，71.0%，与对照组相比差异有显著性；对鼻咽癌细胞CNE-2Z抑制效果以围氏马尾藻最明显，其次是半叶马尾藻。结果见表1，图1。表1  MTT法检测3种多糖对CNE-2Z细胞生长的影响(略)
       3.2  用MTT法检测3种多糖对肺腺癌细胞A549增殖的影响用不同浓度的海藻多糖处理肺腺癌细胞A549后，可见抑制率均随着多糖浓度的增加而增加；当浓度为0.8 mg/ml时，3种多糖对肺腺癌细胞A549的抑制率分别为48.0%，46.2%，51.9%，与对照组相比差异有显著性。对肺腺癌细胞A549抑制效果以围氏马尾藻最明显，其次是半叶马尾藻。结果见表2及图2。表2  MTT法检测3种多糖对A549细胞生长的影响(略)
       4  讨论
          
       癌症对人类健康威胁很大，目前的治疗方法主要有外科手术、放射治疗和化学治疗。但放疗缺乏特异性，在杀死肿瘤细胞的同时，也损伤正常细胞，化学治疗又有很强的副作用，因此，寻找天然低毒高效的抗癌辅助药越来越重要。
       我国海域辽阔，海藻资源丰富，大量的体内外实验充分证明海藻多糖对肿瘤有明显的抑制作用，已用于癌症的辅助治疗。据报道，硫酸化墨角藻多糖在子宫颈癌中能引起显著的细胞毒性效应从而达到治疗作用［3］；硒化麒麟菜多糖具有抗人喉癌细胞株Hep-2增殖的活性，其抑制作用明显优于亚硒酸钠的抗肿瘤活性［4］；Hirayasu等［5］发现海藻硫酸多糖可以通过增加淋巴细胞纤维蛋白溶酶粒酶A的酯酶活性来增强免疫反应，而抑制肿瘤生长；张志娟等［6］发现复合螺旋藻多糖与银杏叶有效成分体外联合使用能协同抑制肝癌细胞增殖。
       
       为了筛选出经济有效的抗癌辅助药，本实验对采集于湛江硇洲岛常见且大量生长的半叶马尾藻，亨氏马尾藻和围氏马尾藻进行多糖提取，并采用MTT法检测其体外抗肿瘤的药理活性，结果证实。3种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549的生长有明显的抑制作用且与浓度呈正相关；同一类的不同马尾藻多糖抗肿瘤活性不同，从图1～2中能看出围氏马尾藻多糖抑瘤作用最强，其次是半叶马尾藻，有希望将围氏马尾藻开发成抗癌辅助药；马尾藻多糖对不同肿瘤的抑制作用也不同，从表1～2中能看出3种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z比对肺腺癌细胞A549抑制作用强，说明不同肿瘤细胞对马尾藻多糖的敏感性不同。
       
       这3种马尾藻均为广东湛江硇洲岛海域常见藻类，且多糖的提取方法简便易行，因此，有希望将马尾藻多糖开发成一种经济、有效、低毒的抗肿瘤药物，这将有可能带来深远的经济效益和社会效益。
       【参考文献】
         　　［1］王新梅，闫美艳.海藻多糖生物活性研究进展［J］.齐鲁药事，2009，28(4)：228.
       
       ［2］孟庆勇，刘志辉，郑 辉.半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠骨髓细胞集落生成的影响 ［J］. 中国海洋大学学报,2005,35(3):503.
       
       ［3］Stevan FR，Oliveira MB，Bucchi DF，et al.Cytotoxic effects against HeLa cells of polysaccharides from seaweeds［J］.J Submicrosc Cytol Pathol，2001，33(4)：477.
       
       ［4］白 雪，林 晨，江振友，等.硒化麒麟菜多糖抑制人喉癌细胞株 Hep22增殖的作用［J］.肿瘤防治研究，2007，34(4）：249.
       
       ［5］Hirayasu H，Yoshikawa Y，Tsuzuki S，et al.Sulfated polysaccharides derived from dietary seaweeds increase the esterase activity of a lymphocyte tryptase，granzyme A［J］.J Nutr Sci Vitaminol(Tokyo)，2005，51(6)：475.
       
       ［6］张志娟，乔明霞，郝言芝，等.复合螺旋藻多糖对人肝癌7402细胞的抑制作用［J］.陕西医学杂志，2009，38(3)：279.