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       【关键词】  脂清胶囊；,,虎杖；,,山楂；,,当归；,,大黄素；,,薄层色谱；,,高效液相色谱
       摘要：目的建立脂清胶囊（虎杖，山楂，当归等）的质量标准控制方法。方法采用薄层色谱法（TLC）对处方中山楂、当归进行定性鉴别；采用高效液相色谱法(HPLC)对虎杖中大黄素进行含量测定。高效液相色谱条件： Agilent1100，ODSC18柱，流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20）。结果山楂、当归的薄层色谱图斑点清晰，具有专属性；大黄素在0.306~0.816 μg范围内线性关系良好，r＝0.999 9，平均回收率为99.22％，RSD为2.4％。结论 该方法能准确可靠地进行定性、定量检测，能有效地控制脂清颗粒的质量。
       关键词：脂清胶囊；  虎杖；  山楂；  当归；  大黄素；  薄层色谱；  高效液相色谱
       Quality Standard for Zhiqing Capsule
       WANG Yuhong, 　ZHOU Xin-pei
       (The First Affiliated Hospital, Huanan TCM University, Changsha 410007，China)
       Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard for Zhiqing Capsule (Rhizoma Polygontum Cuspidatum, Fructus Crataegi, Radix Angelicae Sinensis, etc.).MethodsThe identification and inspect were carried out by TLC. Emodin in preparation was determined by HPLC. The HPLC conditions was as follows: Aglilent 1100 ODS C18 column, and the mobile phase was MeOH0.1%phosphoric acid buffer solution (80∶20 ).ResultsTLC method was specific, HPLC method was accurate and reliable, the recovery was 99.22% , RSD was 2.4%. ConclusionThis standard can be used for the quality control of Zhiqing Capsules.
       Key words：Zhiqing Capsules;  Rhizoma Polygontum Cuspidatum;  Fructus Crataegi;  Radix Angelicae sinensis;  Emodin;   TLC;  HPLC
   
　　脂清胶囊是由虎杖、山楂、当归3味药材制成的中药复方制剂，具有活血降浊，润肠通便之功效，用于瘀浊内盛而致的高脂血症。是我院临床应用多年，疗效确切的制剂。原标准仅有理化鉴别而无薄层鉴别和含量测定，为更有效地控制药物质量，本文建立了山楂、当归的薄层色谱鉴别;大黄素的含量测定项。
       　1  仪器与试药
       Agilent高效液相色谱仪；TU1901双光束紫外分光光度计；SK5200H 超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；AY120型电子天平(日本)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；山楂对照药材( 92829001)、当归对照药材（9271200110）及大黄素对照品(880200001)（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯；脂清胶囊由湖南中医学院药剂科制剂室提供。试剂：甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
       2  质量标准
       2.1  山楂鉴别
       2.1.1  山楂的TLC取本品粉末1 g，加醋酸乙酯4 ml，超声处理15 min，滤过，滤液作为供试品溶液。同法制备缺山楂的阴性样品溶液。另取山楂对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取熊果酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述4种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯醋酸乙酯甲酸（20∶4∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液（3→10），在80℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同紫红色斑点；紫外光灯（365 nm）下，显相同橙黄色荧光斑点。结果见图1。
       2.1.2  当归的TLC  取本品1 g，加甲醇10 ml，超声提取30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。同供试品溶液的制备方法制备缺当归的阴性样品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2000年版Ⅰ部附录ⅥB）试验［1］，吸取上述3种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－醋酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色荧光斑点。阴性对照溶液无干扰。结果见图2。
       2.2  含量测定
       2.2.1  实验条件色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇 -0.1% 磷酸溶液（80∶20）为流动相；检测波长为254 nm；柱温：25℃。流速：1 ml・min-1。理论板数按大黄素峰计算应不低于3 000。
       2.2.2  测定方法对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥 24 h的大黄素对照品适量，加甲醇配制成每毫升中含 51 μg 的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品10粒，研细，取约0.03 g各3份，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入氯仿 25 ml 和 2.5 mol/L 硫酸溶液 20 ml ，称定重量，置水浴中分别加热回流 1 ，2，3 h（水温 80 ℃ ），冷却至室温，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，精密吸取氯仿层 10 ml ，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至 10 ml ，用微孔滤膜（ 0.45 μm ）滤过，取续滤液即得。阴性溶液的制备：按处方制成的缺虎杖的样品0.03g，精密称取，照供试品溶液的制备方法制备。
       2.3  测定波长的选择取大黄素对照品溶液于TU-1901双光束紫外分光光度计上进行光谱扫描，结果大黄素在254nm波长处有较大的吸收。结果见图3。
       图1  山楂薄层色谱图（荧光）（略）         
       图2  当归薄层色谱图（荧光）（略）
       图3  大黄素的紫外扫描图（略）
       2.4  空白实验按上述色谱条件，吸取药材溶液、供试品溶液、对照品溶液及阴性溶液各10 μl，分别注入色谱仪中。供试品色谱图中,在与对照品色谱图相应的位置上,有一相同的色谱峰,而阴性溶液在此保留时间无干扰。结果见图4。
       图4  缺虎杖的阴性样品、大黄素、虎杖、药材、供试品HPLC图谱（略）
       2.5  方法学考察
       2.5.1  线性关系　 精密称取大黄素对照品溶液（51μg/ml）,6，8，10，12，14，16 μl 注入高效液相色谱仪，测定，以峰面积为纵坐标，进样量为（μg）为横坐标绘制标准曲线。结果表明：大黄素对照品在0.306~0.816 μg范围内线性关系良好，其回归方程为：Y=2428X-53 ，r=0.999 9。
       2.5.2  精密度实验精密吸取同一供试品溶液，连续重复进样5 次，每次10 μl，测定峰面积值，结果RSD为0.52 ，精密度良好。
       2.5.3  重复性实验取同一样品5份，按含量测定项下的方法分别测定，结果RSD为1.72 ，样品测定有良好的重复性。
       2.5.4  稳定性实验　取同一供试品溶液，25℃室温放置，按含量测定项下的色谱条件测定其峰面积,分别于0，4，8，12，16 h进样，每次10 μl，结果RSD为1.17 ,说明样品在16  h内是稳定的，满足测试要求。
       2.5.5  回收率取已知含量（64.2 mg/g)的样品约为16 mg，精密称定，共取5份，分别精密加入大黄素对照品溶液(浓度为0.51 mg/ml)2 ml，根据上述供试品溶液的制备方法制备和测定， 按外标法以峰面积计算供试品中大黄素的量，计算回收率。结果见表1。结果表明平均回收率为99.22％ ,方法可靠。
       表1  回收率实验（略）
       2.6  样品测定取样品10批,按含量测定方法分别精密吸取对照品与供试品溶液各10 μl，注入色谱仪,按外标一点法计算样品含量。结果见表2。
       表2  样品测定结果（略）
       3  讨论
       3.1   虎杖为方中君药，大黄素为其活血化淤、降血脂的主要成分，故本文采用HPLC法测定大黄素的含量来达到控制制剂的目的。
       3.2  检测波长的选择：取大黄素对照品溶液在200～600 nm波长范围内进行扫描，结果大黄素在254 nm波长处有较大的吸收, 分别吸取药材溶液、供试品溶液、对照品溶液及阴性溶液各10 μl注入色谱仪中，供试品色谱图中,在与对照品色谱图相应的位置上,有一相同的色谱峰,而阴性溶液在此保留时间无干扰。故选定测定波长为254 nm。
       3.3   在样品前处理方法考察中,我们比较了超声,回流等不同的提取方法,结果表明，采用回流提取的方法，分离效果好，重复性良好，且空白制剂无干扰，可以用于控制该制剂的质量。
       3.4   方法学研究表明，采用薄层色谱法对处方中的山楂、当归进行定性鉴别斑点清晰，专属性好；采用高效液相色谱法对虎杖中大黄素进行含量测定，结果准确，重复性好，能有效控制产品质量。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部 ［S］. 北京：化学工业出版社，2005：145.
       (湖南中医学院第一附属医院，湖南 长沙  410007)