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       【摘要】 
       目的紫菀与款冬常被作为药对一同使用，有化痰止咳之效。前期研究显示紫菀具有一定毒性，而款冬与之配伍后具有减毒作用。本实验旨在确定紫菀的毒性部位，并找到款冬花与之配伍的相杀部位。方法以小鼠急性毒性为指标，比较紫菀不同溶剂提取物的毒性，选择毒性最大的提取物筛选紫菀的毒性部位；将款冬花不同溶剂提取物与紫菀提取物配伍，选择减毒效果最佳的提取物，通过配伍实验确定款冬花有效降低紫菀毒性的部位，即相杀部位。结果紫菀乙醇提取物的毒性大于水提物，且其毒性随着乙醇浓度的增加而增加，90％醇提物毒性最大；毒性部位追踪结果显示，除醋酸乙酯部位外其他3个部位均未表现毒性，说明其毒性成分集中。款冬花不同提取物与紫菀配伍后，30％乙醇提取物的效果最为显著；相杀部位筛选结果显示，水部位没有减毒效果，醋酸乙酯和正丁醇部位效果相当。结论紫菀的毒性部位为90%乙醇提取物的醋酸乙酯部位，款冬花的相杀部位为30%醇提物的醋酸乙酯部位及正丁醇部位。
       【关键词】  紫菀 款冬花 配伍 毒性部位 相杀部位
       Toxic Part of Radix Asteris and Antagonizing Part of Flos Farfarae in Pair-drug of FF and RA
       SHAO Jing, JIN Jing, ZHANG Mian, HUANG Fang, DOU Changgui, WEI Yanyan
       1.Key Laboratory of Modern Chinese Medicines of Ministry of Education, China Pharmacological University, Nanjing  210038,China; 2.College of Traditional Chinese Medicine, China harmacological University, Nanjing 210038, China
       Abstract：Objective To find out the toxic part of RA and the part of FF which can effectively lower the toxicity of RA. MethodsWith the death of mice as index, comparing the toxicity of the different solvent extracts of RA, dividing the most toxic one into several different fractions and searching the toxic fraction. Matching the different extracts of FF with the extracts of RA in order to search the FF extract and fractions which can lower the toxicity of RA effectively. ResultsThe ethanol extracts RA was more toxic than its aqueous extract and its toxicity increased when the concentration of ethanol was higher, and the 90% ethanol extract was the most toxic extract. The result on searching the toxic fraction of RA showed that the acetic ether part was the only toxic fraction. Although the different extracts of FF could alleviate RA’s toxicity, the 30% ethanol extract showed the best activity, and the acetic ether and n-butanol parts both showed equivalent antitoxic activity. ConclusionThe toxicant of RA mainly concentrates in the acetic ether part of 90% ethanol extract. The antagonizing fraction from FF is the parts of acetic ether and n-butanol of 30% ethanol extract.
       Key words：Radix Asteris;  Flos Farfarae;  Compatibility;  Toxic part;  Antagonistic part
       紫菀、款冬花是临床常用的治疗咳嗽的中药，且常配伍使用，《本经疏证》中写道：千金外台咳逆久嗽，并用紫菀款冬者，十方而九。紫菀长于化痰，款冬花优于止咳，在药效学上符合“相须配伍”理论；但对于二者的毒性，历代本草均未记载，《名医别录》中还明确指出，紫菀“辛，无毒”，款冬花“甘，无毒”［1］。
       紫菀为菊科植物紫菀Aster tataricus L. f. 的干燥根及根茎，款冬花为同科植物款冬Tussilago farfara L.的干燥花蕾。近年来，款冬由于含有吡咯里西啶类生物碱而被认为具有一定的肝脏毒性［2］，对于紫菀历代本草及现代中医药专著均沿袭了其“无毒”的说法。但本课题组的前期研究［3］发现，款冬花的毒性不明显，而紫菀具有较大的肝脏毒性，款冬花与紫菀配伍后能显著降低紫菀的毒性，符合中药配伍的“相杀”理论。本论文在前期研究基础上，以急性毒性为指标，研究确定了紫菀的毒性部位，并通过配伍研究款冬花的“相杀”部位，为阐明紫菀款冬花“相杀”配伍的物质基础提供毒理学依据。
       1  材料与仪器
       1.1  动物昆明种小鼠,雌雄各半,体重18～22 g,由南京青龙山实验动物中心提供。
       1.2 药物紫菀和款冬花均购自河北安国药材市场，经中国药科大学生药研究室张勉博士鉴定，凭证标本保存于中国药科大学生药学研究室。石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、乙醇、甲醇等试剂均为市售分析纯。
       1.3 仪器旋转蒸发仪，瑞士Buchi实验仪器公司，型号：R-2000；数显恒温水浴锅，国华电器有限公司，型号：HH-4；电子天平，型号：PL303，Matter-Toledo Group；医用数控超声仪，型号：KQ-250DE，昆山超声仪器有限公司。
       2 方法
       2.1 急毒实验方法健康昆明种小鼠，称重后随机分组，每组10只，雌雄各半。实验前小鼠适应环境3 d。药物均以0.5% CMCNa置超声仪中溶解，加少量DMSO助溶。急毒实验前禁食12 h，不禁水，灌胃给予相应的药物，一次给药；空白组给以相同体积的0.5% CMCNa加少量DMSO。给药0.5 h后开始观察小鼠的中毒体征。连续7 d观察小鼠死亡情况，随时取出死亡小鼠，记录死亡时间。
       2.2 紫菀提取溶剂和毒性部位的筛选紫菀粉碎成粗粉后分别用10，8，8倍量的水，30%乙醇，60%乙醇和90%乙醇各回流提取3次（2，1，1 h），合并提取液，过滤，滤液减压回收溶剂后水浴蒸干。取50只健康小鼠随机分成5组，进行急毒实验，分别设为空白组，水提组，30%醇提组，60%醇提组和90%醇提组，各组药物均以15 g/kg（浸膏量）给药，给药体积0.3 ml/10 g。
       
       将紫菀的90％醇提物混悬于水中，用萃取法将其分为石油醚部位、醋酸乙酯部位、正丁醇部位及水部位。以急毒为指标，筛选紫菀的毒性部位。将50只健康小鼠随机分成5组，进行急毒实验，分别设为空白组、石油醚部位组、醋酸乙酯部位组、正丁醇部位组及水部位组，各部位均以0.5 g/kg（部位量）给药，给药体积0.2 ml/10 g。
       2.3 款冬花提取溶剂和相杀部位（减毒部位）的筛选 款冬花粉碎成粗粉后分别用10，8，8倍量水，30%乙醇，60%乙醇和90%乙醇各回流提取3次（1.5，1，1 h），合并提取液，过滤，滤液减压回收溶剂后水浴蒸干。将以上各提取物分别与紫菀90%醇提物按生药量1∶1配伍进行急毒实验，分别设为空白组、紫菀90%醇提组（对照组）、紫菀90%醇提+款冬水提组、紫菀90%醇提+款冬30%醇提组、紫菀90%醇提+款冬60%醇提组、紫菀90%醇提+款冬90%醇提组。给药体积0.3 ml/10 g。
       
       将款冬花30%乙醇提取物置于水中，分别用醋酸乙酯、正丁醇萃取，得到醋酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位。将以上各部位分别与紫菀毒性部位（醋酸乙酯部位）按部位量1∶1配伍，进行急毒实验，分别设为空白组、紫菀醋酸乙酯部位组（对照组）、紫菀醋酸乙酯部位+款冬醋酸乙酯部位组、紫菀醋酸乙酯部位+款冬正丁醇部位组、紫菀醋酸乙酯+款冬水部位组。给药体积0.2ml/10g。
       3 结果
       3.1 紫菀不同溶剂提取物的毒性中毒小鼠依次出现活动明显减少，精神萎靡，被毛蓬松潮湿，双目紧闭，不自主颤抖等现象，直至呼吸停止。给药后3～6 h为死亡高峰期，死亡现象均发生在24 h内。尸体解剖后，肉眼观察肝显黄色或白色斑点，表现为明显的肝中毒。急毒实验结果（表1）显示，水提组紫菀毒性最小，随着乙醇浓度的增加紫菀提取物的毒性逐渐增大，90%醇提紫菀毒性最大，故选其作为紫菀的提取溶剂。表1  紫菀不同溶剂提取物给药小鼠急性毒性实验结果（略）
       3.2 紫菀毒性部位的筛选紫菀90％醇提物的4个部位的急毒实验结果（表2）显示，给药3 h后醋酸乙酯部位组即出现小鼠死亡现象，24 h内醋酸乙酯部位组小鼠全部死亡，而其他组小鼠均无一死亡，说明醋酸乙酯部位为紫菀的毒性部位。表2  紫菀90%醇提物萃取部位给药小鼠急性毒性实验结果（略）
       3.3 款冬花不同溶剂提取物的相杀（减毒）效果比较款冬花不同溶剂的提取物与紫菀90％醇提物配伍后，明显延缓了小鼠的死亡时间，在一定程度上使紫菀的毒性有所降低。实验结果（表3）显示，30%醇提款冬与紫菀配伍后小鼠死亡率最低，即其与紫菀的相杀效果最佳，从而确定30%乙醇作为款冬花与紫菀相杀配伍的最佳提取溶剂。表3  紫菀90%醇提物与款冬花不同溶剂提取物配伍给药小鼠的急性毒性实验结果（略）
       3.4 款冬花相杀（减毒）部位的筛选 款冬花30％醇提物分成的3个部位与紫菀的毒性部位（醋酸乙酯部位）配伍后，急性毒性实验结果（表4）显示，款冬花的醋酸乙酯和正丁醇部位具有减毒作用，且减毒效果相当，而水部位几乎无减毒作用。表4  紫菀醋酸乙酯部位与款冬花
       不同部位配伍给药小鼠的急性毒性实验结果（略）
       4 讨论
       紫菀的毒性过去从不为人所重视，仅有少数本草对紫菀的使用注意稍有叙述，《本草经疏》在“肺病咳逆喘嗽”证中提到紫菀“不宜专用及多用”。《本草新编》在款冬项下写到：“紫菀虽亦止久嗽，而味苦伤胃，不若款冬之味甘，清中有补也。”古人对长期使用紫菀有一定看法，但主要的经典著述对紫菀毒性尚没有明确的认识。
       
       本实验以小鼠急性毒性为指标，首次对紫菀的提取溶剂和毒性部位进行了研究，发现紫菀的90%乙醇提取物毒性最大，提示紫菀中的毒性成分可能是极性相对较小的成分。在确定90%乙醇作为紫菀毒性研究的最佳提取溶剂后，对其部位进行了划分，通过小鼠急毒实验找到了紫菀的毒性部位——醋酸乙酯部位。有研究［4］表明，紫菀祛痰作用的有效部位为石油醚部位和醋酸乙酯部位，我们将继续研究其醋酸乙酯部位的祛痰作用是否与其中的毒性成分有关。
       
       紫菀、款冬花是一个常用药对，课题组前期研究［3］也发现了款冬花对紫菀毒性的拮抗作用。在紫菀毒性研究的基础上，我们对款冬花与紫菀的配伍进行了研究，以期找到款冬花对紫菀减毒效果最佳的提取溶剂和减毒部位（相杀部位）。实验结果显示款冬30％乙醇提取物的减毒效果最好，而其中的醋酸乙酯和正丁醇部位具有较好的减毒效果，应为款冬花对紫菀的相杀部位。该结果提示减毒成分在醋酸乙酯和正丁醇部位均有分布或减毒作用是多成分共同作用的结果,而这两个部位中的主要成分为有机酸、黄酮及其苷类，下一步我们将继续研究减毒作用与哪些成分有关。
       款冬花与紫菀性味功用相似，二者伍用能增强其止咳、祛痰、平喘的效果，在中药“七情”配伍中属相须配伍；同时，款冬花与紫菀配伍后亦能显著减轻后者的毒性，在中药“七情”配伍中这种毒性上相互制约的作用又称为相杀配伍。但其相杀作用的物质基础及作用机制的阐明有待于进一步的研究与分析。
       【参考文献】
         　　［1］梁·陶弘景,著,尚志均,辑校.名医别录［M］.北京:人民卫生出版社,1986:148,243.
       
       ［2］王浴生.中药药理与应用,第1版［M］.北京:人民卫生出版社,1983:1132.
       
       ［3］张建伟,窦昌贵,张勉,等.紫菀、款冬及其配伍的毒性及药效学研究［J］.中国临床药理学与治疗学,2007,12(4):405.
       
       ［4］卢艳花,戴岳,王峥涛,等.紫菀祛痰镇咳作用及其有效部位和有效成分［J］.中草药，1999，30（5）：360.