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       【摘要】 
       目的探讨哮喘宁合百令胶囊治疗哮喘的作用机制。方法酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定大鼠哮喘急性期细胞因子白介素-4(IL-4)，白介素-5(IL-5)，干扰素-γ(IFN-γ),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量，用t检验进行统计分析。结果哮喘宁合百令胶囊对大鼠哮喘急性期细胞因子IL-4，IL-5，IFN-γ，TNF-α的含量有显著的影响。结论哮喘宁合百令胶囊有显著的改善大鼠哮喘急性期细胞因子指标的作用。
       【关键词】  哮喘宁; 百令胶囊; 哮喘; 细胞因子
       哮喘宁是三拗汤加味而成，由麻黄、杏仁、射干、半夏、甘草、生石膏、桑白皮、黄芩等中药组成，具有宣通肺气、止咳平喘的作用，用于支气管哮喘，咳嗽，老年痰喘等治疗。
       支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞(EOS)、肥大细胞(MC)、T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的慢性气道炎症。而这些炎症细胞的增殖、生长、分化、移行、聚集、浸润、活化与其自身分泌的细胞因子息息相关。
       本研究观察细胞因子IL-4，IL-5，IFN-γ,TNF-α含量的差异，通过哮喘宁合百令胶囊干预哮喘大鼠血清中IL-4，IL-5，IFN-γ,TNF-α含量的影响来探讨哮喘宁合百令胶囊对Th1/Th2的调控作用及防治哮喘的作用。
       1 材料与仪器
       1.1 动物雄性SD大鼠60只(7～8周龄)，体质量(200±10)g，中南大学实验动物中心，动物合格证号：医动字：08-005。
       1.2 试剂大鼠IL-4，IL-5，IFN-r,TNF-ɑ试剂盒均购自尚柏生物医学技术北京有限公司。哮喘宁(自制);百令胶囊，国药准字Z10910036，030809;0.2 g/粒，30粒装，杭州中美华东制药有限公司产品。卵蛋白(OVA)，华美生物工程公司。百日咳杆菌，湖南省药品生物制品检验所产品，含量，1.04×1011个/ml;地塞米松片，0.75 mg/片，030605，海南制药厂有限公司产品。
       1.3 仪器酶标仪(BIO-RAD,250，美国)，微量进样器，TBL型低温高速离心机，-80℃冰箱;YWQ-1型多功能小型医用雾化器，天津建隆电子有限公司产品。
       2 方法
       2.1 分组50只大鼠随机分成5组，即正常对照组、模型组、哮喘宁合百令胶囊组、哮喘宁组、地塞米松组，各组均为10只。
       2.2 动物造模哮喘模型参照吕国平等[1]介绍的方法，分致敏和激发两步。
       2.2.1 致敏用1 ml 0.9% NaCl配制的OVA混悬液(100 mg OVA+100 mg氢氧化铝+百日咳杆菌6×109个)开始隔天腹腔注射，直至第14 天。
       2.2.2 激发从第15天起将除正常对照组外动物放入密闭的雾化箱内，雾化吸入生理盐水配制的3%OVA(流量为3 ml/min)，1次/d，每次20 min，直至第28天。
       2.3 给药方法各组均从激发那天开始给药，1次/d。
       2.3.1 正常对照组和模型组从造模第15天起开始经口灌生理盐水1ml。
       2.3.2 哮喘宁合百令胶囊组从第15天起开始经口灌药，哮喘宁4.5ml·kg-1·d-1 [2](相当于人50 ml·d-1)，百令胶囊0.54g·kg-1·d-1(相当于人30粒·d-1)。
       2.3.3 哮喘宁组从第15天起开始经口灌药，4.5ml·kg-1·d-1(相当于人50 ml·d-1)。
       2.3.4 百令胶囊组从第15天起开始经口灌药，0.54 g·kg-1·d-1(相当于人30粒·d-1)。
       2.3.5 地塞米松组从第15天起开始经口灌药，1 mg·kg-1·d-1(相当于人12 mg·d-1)。
       2.4 血清取材方法各组大鼠经12%乌拉坦[1 ml·(100 g)体质量]腹腔注射麻醉，待大鼠进入麻醉状态后，打开腹腔，充分暴露腹腔血管，分离腹主动脉取血，混匀后1 500 r·min-1离心10 min，小心吸取上部血清，保存于-80℃冰箱中。
       2.5 测定方法用双抗体夹心ABC-ELISA法，IL-4，IL-5，IFN-γ,TNF-α含量测定分别用大鼠IL-4，IL-5，IFN-γ，TNF-α定量试剂盒检测。检测程序按照试剂盒说明书进行。
       2.6 数据分析各组数据均值以±s表示，用t检验进行统计分析。
       3 结果
       血清IL-4，IFN-γ，IL-4/IFN-γ，IL-5，TNF-α的含量变化(激发两周后)见表1。
       4 讨论
       以T细胞为中心的免疫应答与哮喘炎症的形成密切相关，MC、EOS为哮喘炎症的效应细胞，T细胞为调节细胞，T细胞以分泌的细胞因子不同而分为Th1、Th2两类。Th1产生IL-2和IFN-r介导细胞免疫应答，哮喘中主要表现在介导迟发型变态反应;Th2产生IL-4、5、6、9、10、13主导B细胞主导的体液免疫应答及Ⅰ变态反应。过敏症和哮喘个体存在Th1/Th2功能失调，主要表现在Th2亚型功能亢进，介导了IgE依赖的速发型变态反应及以EOS为主的气道炎症。Th1/Th2中存在相互制约，相互促进因子，其中IL-4、IL-10抑制Th1细胞，IL-12、18，IFN-r抑制Th2细胞，哮喘患者由于这些因子分泌失衡导致Th1/Th2失衡。
       本实验结果显示，哮喘模型大鼠血浆中IL-4升高，IFN-γ降低，说明哮喘中存在Th亚群功能失衡，Th2细胞功能亢进。当IL-4/IFN-γ比例失衡即IL-4过量产生和IFN-γ分泌减少时，导致血清IgE升高，诱发哮喘。
       本实验结果显示，IL-4显著升高与哮喘症状的明显加重呈正相关，IFN-γ亦相应降低，模型组比值的显著升高证实了炎症发生发展过程中存在IL-4/IFN-γ比例严重失衡。与正常对照组比较，哮喘模型组大鼠IL-4显著升高、IFN-γ明显降低，提示哮喘Th1/Th2细胞平衡存在，与文献所述相符[3，4]。与哮喘模型组比较，哮踹宁合百令胶囊组激发二周后的IL-4明显降低，IFN-r明显升高，IL-4/IFN-γ比值较模型组显著下降，和地塞米松治疗后哮喘大鼠的改善相似。说明哮喘宁合百令胶囊组通过机体的免疫调节良性调节IL-4/IFN-γ比例，使细胞平衡逐渐恢复，降低血清IgE的水平，从而控制哮喘的发作。
       本实验结果显示在哮喘发作时，Th1/ Th2比例失衡，Th2反应亢进，IL-4、IL-5的分泌增多，IFN-γ的产生减少。地塞米松组在激发两周后IL-5表达与哮喘宁合百令胶囊组比较有明显差异，表明激素能更好的抑制IL-5的分泌，从而抑制嗜酸粒细胞的浸润，降低哮喘发生的机率。相比较哮喘宁合百令胶囊组虽然较地塞米松组对IL-5的影响力差，但与模型组比较仍显著，能显著抑制IL-5的分泌，抑制了嗜酸粒细胞的趋化和募集，从而获得了较好疗效。表1 各组大鼠血中IL-4，IFN-γ，IL-4/IFN-γ，IL-5，TNF-α的变化
       本实验结果显示，从TNF-α的表达上能一定程度上反映病情的轻重，可以看出哮喘宁合百令胶囊组炎症的程度与地塞米松组无明显差异，能较好控制炎症的发展，疗效可以肯定。
       本实验结果显示，炎症因子能在一定程度上反映病情的轻重，可以看出哮喘宁合百令胶囊组控制炎症因子的程度与地米组无明显差异，能较好控制炎症的发展，疗效可以肯定;哮喘宁组、百令胶囊组能在一定程度上控制炎症的发展，对哮喘有一定的治疗作用，但二者合用，则能显著提高疗效，这对指导临床用药有一定的指导意义。
       【参考文献】
         　[1] 吕国平，崔德健，郭英江，等.介绍一种建立大鼠哮喘模型的实验方法[J].中华结核和呼吸杂志，1995，18(6):377.
       
       [2] 陈 奇.中药药理实验方法[M].北京：人民卫生出版社，1994，12：205.
       
       [3] 施举红，李太生，林耀广. Th1/ Th2在支气管哮喘大鼠气道炎症过程中的变化[J]. 中华结核呼吸杂志，2004，27(8)：519.
       
       [4] 壮 健，孙秀芳，徐孝萍，等.消喘膏贴敷对哮喘豚鼠Thl/Th2类细胞因子的影响[J].四川中医2003，21(6):126.